http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/94 Wed, 22 May 2013 04:08:07 GMT 2013-05-22T04:08:07Z http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8641 Title: The role of DEPDC1 (DEP domain containing 1) in breast cancer aggressiveness Authors: Marotta, Carolina Abstract: Metastasis formation is the final step in a solid tumour progression and is the most common cause of death in cancer patients. Therefore novel therapeutic strategies to prevent development of metastases have a potential impact on cancer mortality. In the last years, work from our lab has identified that, following oncogenic signalling, the phosphorylation-dependent prolyl-isomerase Pin1 amplifies mutant p53 oncogenic functions. In particular, we have demonstrated the relevance of a Pin1/mutant p53 axis in controlling directly a transcriptional “ten genes signature” program relevant for tumour growth and invasion. This signature includes genes relevant for breast cancer progression, correlated to poor outcome of breast cancer patients. Among these, we have unveiled DEPDC1 as a potent promoter of invasiveness and migration in MDA MB231 triple negative breast cancer (TNBC) cells. This gene is has been found overexpressed in different mouse and human tumours, such as breast carcinoma, colorectal and lung adenocarcinomas. The aim of my PhD work was to investigate the role of DEPDC1 in the cancer progression that is linked to cell-biological traits associated with high-grade malignancy - including motility, invasiveness and loss of polarity. We found that the high DEPDC1 expression level positively correlates with clinical outcome and aggressiveness in breast cancer and we demonstrate that DEPDC1 regulates important phenotypes involved in tumour formation and progression. First, we identified a role of DEPDC1 in promoting aggressive cancer phenotypes in vitro by regulating cell motility, polarity and proliferation. Second, we have evaluated that the establishment of lung metastasis in vivo in mice was reduced upon inhibition of DEPDC1. Third, we demonstrate the tumorigenic potential of DEPDC1-V1 alone or cooperating with oncogenic H-Ras on induction of malignant cell transformation. Finally, a preliminary data shows that DEPDC1 is also able to increase the efficiency of mammosphere formation of breast cancer cells, implicating a role in cancer stemness. Until now, our results support the strong impact of DEPDC1 on tumour progression while molecular pathways perturbed by DEPDC1 and by which drive the cancer progression are still unknown. However, our analysis of RNA-seq data upon silencing of DEPDC1, suggests the mechanism by which DEPDC1 could induce an aggressive phenotype altering the gene expression profile of breast cancer cells. Future studies will address the molecular networks by which DEPDC1 drives the metastatic cancer progression that could be useful for discovering the novel therapeutic targets and diagnostic markers in breast cancer. Description: 2011/2012 Type: Tesi di dottorato; Doctoral Thesis Mon, 22 Apr 2013 00:00:00 GMT http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8641 2013-04-22T00:00:00Z http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8640 Title: Internal targets and killing mechanism of the cathelicidin Bac7 in Gram-negative bacteria Authors: Mardirossian, Mario Abstract: Bac7(1-35) is the smallest fragment of the proline-rich cathelicidin Bac7 that shows the same antibacterial activity as the whole natural peptide of 60 residues. In this work, we remarked that the unique gene whose deletion can confer resistance to E. coli against Bac7(1-35) is sbmA, coding for an inner membrane protein involved in the penetration of this peptide into bacterial cells. Moreover, we provided evidence that SbmA is also involved in the transmembrane transport of a fragment of another proline-rich antimicrobial peptide, arasin1(1-23), isolated from the spider crab. These findings suggest a general role of this membrane protein in the uptake of proline-rich antimicrobial peptides (PR-AMPs) into Gram-negative bacteria. We then measured the intrabacterial concentration reached by Bac7(1-35) in E. coli, and observed that this increases from micromolar in the medium to millimolar within the bacterial cell, suggesting that it may bind to cytosolic structures. For this reason, we looked for possible interactions between Bac7(1-35) and macromolecules involved in viable processes of bacteria. These studies showed that Bac7(1-35) completely inhibits in vitro the transcription/translation process starting from a concentration of 50 μM. Then we demonstrated that inhibition is: i) specific for Bac7(1-35), since it is not exerted by other cathelicidin-derived AMPs not belonging to the Prorich group, and ii) not stereo-specific, since it is exerted at the same level by the all-D isomer of Bac7(1-35). We also demonstrated the ability of Bac7(1-35) to bind DNA in vitro, but we excluded that this binding may represent the primary mechanism of bactericidal action. We also showed that the peptide does not significantly affect in vitro the transcription process, deducing that the inhibition of the transcription/translation targets primarily the translation process. We verified these data in vivo on E. coli cells measuring the incorporation of radioactive precursors of bacterial macromolecules. We observed that the exposure of bacteria to Bac7(1-35) inhibited the incorporation of radioactive leucine, but not of radioactive thymidine and uridine, indicating a specific block at the protein synthesis level and not of DNA and RNA synthesis. In the near future, a clearer definition of the intrabacterial target(s) of Bac7(1-35) would hopefully lead to the experimentation of this molecule or of its derivatives as a new generation antibiotic drug.; Bac7(1-35) è il più breve frammento del peptide Bac7, una catelicidina ricca in prolina di 60 residui, dotato della stessa attività battericida del peptide intero. In questo lavoro di tesi, abbiamo rimarcato che sbmA è l’unico gene la cui delezione conferisce ad E. coli una resistenza a Bac7(1- 35). Tale gene codifica per una proteina della membrana interna coinvolta nell’ingresso del peptide nel citoplasma della cellula batterica. Inoltre, abbiamo dimostrato che SbmA è coinvolta anche nel trasporto transmembrana di un frammento di un altro peptide antimicrobico, l’arasina1(1-23). Tali risultati suggeriscono che questa proteina giochi un ruolo generale nell’internalizzazione di peptidi antimicrobici ricchi in prolina nei batteri Gram-negativi. Abbiamo quindi misurato la concentrazione intrabatterica raggiunta da Bac7(1-35) in E. coli e abbiamo osservato che questa aumenta da valori micromolari nel terreno di coltura a millimolari nel citosol batterico, suggerendo un suo legame a strutture interne della cellula. Per questo abbiamo cercato possibili interazioni tra il peptide e macromolecole coinvolte in processi vitali del batterio. Con questi studi abbiamo appurato che Bac7(1-35) in vitro inibisce completamente il processo di trascrizione/traduzione a partire da una concentrazione di 50 μM. Successivamente abbiamo dimostrato che questa inibizione è una peculiarità di Bac7(1-35), in quanto altri AMP derivati da catelicidine ma non ricchi in prolina non hanno dimostrato un’attività comparabile. Inoltre, questa inibizione non è stereo-specifica, in quanto anche l’isomero D di Bac7(1-35) blocca tale processo esattamente come il suo isomero L. Abbiamo inoltre dimostrato la capacità di Bac7(1-35) di legare in vitro il DNA, ma abbiamo escluso che tale legame rappresenti il meccanismo primario della sua attività battericida. Abbiamo anche dimostrato che il peptide non interferisce in vitro in maniera significativa con il processo di trascrizione, deducendo che l’effetto osservato sul processo di trascrizione/traduzione fosse da attribuirsi prevalentemente all’inibizione della traduzione. Abbiamo verificato tali dati in vivo su cellule di E. coli misurando l’incorporazione di precursori radioattivi delle macromolecole batteriche. Abbiamo osservato che l’esposizione di batteri a Bac7(1-35) bloccava l’incorporazione di leucina radioattiva ma non di timidina ed uridina, indicando un blocco specifico della sintesi proteica ma non di quelle di DNA e RNA. In futuro, una definizione ancora più chiara del target intrabatterico di Bac7(1-35) potrebbe portare alla sperimentazione di tale molecola o di suoi analoghi come farmaci antibiotici di nuova generazione. Description: 2011/2012 Type: Tesi di dottorato; Doctoral Thesis Mon, 22 Apr 2013 00:00:00 GMT http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8640 2013-04-22T00:00:00Z http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8636 Title: Identification of vesicular SNARE proteins involved in the secretoryintracellular trafficking of IL-12 in dendritic cells Authors: Chiaruttini, Giulia Abstract: Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells. They have the unique ability of recognizing antigens, internalizing and processing them for presentation on MHC complexes. DCs also express pattern-recognition receptors like Toll-like receptors (TLRs), which recognize pathogen-associated molecular patterns and induce DCs maturation. As a consequence DCs increase their antigens presenting ability, their levels of co-stimulatory molecules on the cell surface, and their production of cytokines, which are critical for inducing specific T cell activation. All these functions make DCs key elements in the immunological response against pathogens, viruses and tumors. One of the most important cytokines in T cell priming, interleukine-12 (IL-12), begins to be largely transcribed immediately after TLR activation. We have previously shown that in DCs engaged in antigen specific immunological synapses (IS), IL-12 is found enriched in the proximity of the contact site between DC and T cells, and several evidences suggest that its secretion is polarized towards the T cell. These data indicate that polarized trafficking of cytokines containing vesicles in DCs is a mechanism to optimize T cell priming. Polarized trafficking of soluble mediators through defined subcellular areas has been described as fundamental for the function of several other immune cells, but at present a clear characterization of the pathways and organelles implicated in the regulation of cytokine secretion in dendritic cells is still missing. The family of SNARE (soluble-N ethylmaleimide sensitive-factor accessory-protein (SNAP) receptor) proteins, which regulate the membrane fusion process during the intracellular trafficking of soluble mediators, has emerged as the most informative for the identification of such pathways. Indeed different SNAREs regulate diverse mechanisms such as the constitutive secretion of immune mediators, phagocytosis and endocytosis, or also the release of inflammatory mediators and products from secretory granules. During my thesis I have investigated the role of SNAREs in IL-12 secretion by DCs. I have analyzed the expression and modulation during maturation of three SNAREs, Syntaxin6, VAMP3 and VAMP7, that were previously shown to play a role in other immune cells. The subcellular localization and co-localization with the IL-12 subunits were analyzed in DCs alone and in the context of IS by immunofluorescence. I performed functional analyses by silencing SNAREs with the siRNA strategy to detect impairment in DC cytokines secretion and in T cell priming. These studies led to the identification of the lysosomal-late endosomal VAMP7 as a specific regulator in the polarized secretion of IL-12 during T cell priming. This suggest a role, in the secretion of soluble newly synthesized mediators, of late endosomal organelles, until now thought to be implicated only in the regulated secretion of pre-constituted mediators such as cytotoxic granules. Furthermore VAMP3 was found to downregulate the production of all the cytokines tested; we propose this SNARE as regulator of the TLR9 signaling pathway. The second part of the work stems from the concept that DCs properties become suppressed by the tumor microenvironment and many evidences suggest that tolerogenic DCs may be a crucial element in the development of tumor-mediated immune anergy. Different steps in the antigen presentation process are impaired, but also the pattern of secreted cytokines is skewed. In particular, how secretion of inflammatory cytokines becomes impaired in tumor-exposed DCs has not been investigated. I set up a model of mice bearing Lewis lung carcinoma (3LL) to analyze DCs in vitro (co-colture) and in vivo (spleen and tumor-bearing lungs). In all the models I observed a strong impairment in IL-12 production, upon restimulation with TLR agonists. In spleen DCs subtypes remained unchanged during tumor progression, whereas in tumor-bearing lungs the DC composition varied, with an expansion of CD11bhi DCs and a reduction in CD103+ DCs. DCs were isolated from all the three models to analyze the expression of trafficking proteins, and I found that tumor-exposed DCs downregulate all the SNAREs and in particular VAMP3. Moreover Rab27a, a GTPase implicated in the regulation of the exocytosis of secretory granules and lysosome-related organelles is also downregulated at protein level. These preliminary observations suggest that regulation of trafficking proteins in DCs may represent a novel pathway targeted during immunosuppression.; Le cellule dendritiche (DC) sono una importante classe di cellule presentanti l'antigene. Hanno l'esclusiva abilità di riconoscere gli antigeni, internalizzarli e processarli per la loro presentazione con il complesso maggiore di istocompatibilità. Le DC esprimono anche recettori "riconoscitori di pattern" come i recettori Toll-like (TLR), che riconoscono pattern molecolari associati ai patogeni e inducono la maturazione delle DC. Come conseguenza le DC aumentano la loro capacità di presentare gli antigeni, i loro livelli di molecole costimolatorie sulla superficie cellulare, e la loro produzione di citochine, che sono fondamentali per indurre l'attivazione specifica delle cellule T. Tutte queste funzioni rendono le DC elementi chiave nella risposta immunologica contro i patogeni, i virus e i tumori. Una delle più importanti citochine per l'induzione delle cellule T, l'interleuchina 12 (IL-12), inizia ad essere estensivamente trascritta immediatamente dopo l'attivatione dei TLR. Il nostro gruppo ha precedentemente mostrato che nelle DC impegnate in sinapsi immunologiche-antigene specifiche (IS), l'IL-12 si trova arricchita in prossimità del sito di contatto tra la DC e le cellule T, e varie evidenze suggeriscono che la sua secrezione è polarizzata verso la cellula T. Questi dati indicano che il traffico polarizzato di vescicole contenenti citochine nelle DC è un meccanismo per ottimizzare l'induzione delle cellule T. Il traffico polarizzato di mediatori solubili attraverso definite aree intracellulari è stato descritto come fondamentale per la funzione di varie cellule immunitarie, ma attualmente una chiara caratterizzazione delle vie di secrezione delle citochine nelle cellule dendritiche è ancora mancante. La famiglia delle proteine SNARE (soluble-N ethylmaleimide sensitive-factor accessory-protein (SNAP) receptor), che regolano il processo di fusione tra le membrane durante il traffico intracellulare di mediatori solubili, è emersa come la più informativa nell'identificazione di questo tipo di vie. Infatti diverse SNARE regolano diversi meccanismi, come la secrezione costitutiva di mediatori immunologici, la fagocitosi e l'endocitosi, o anche il rilascio di mediatori infiammatori e di prodotti sui granoli secretori. Durante la mia tesi ho investigato il ruolo delle SNARE nella secrezione dell'IL-12 nelle DC. Ho analizzato l'espressione e la modulazione durante la maturazione delle SNARE syntaxin6, VAMP3 e VAMP7, precedentemente descritte in altre cellule immunitarie. La localizzazione subcellulare e la colocalizzazione con le subunità dell'IL-12 sono state analizzate nelle DC da sole e nel contesto dell'IS attraverso l'immunofluorescenza. Ho svolto studi funzionali silenziando le SNARE con la strategia dei siRNA, per osservare diminuzioni nella secrezione delle citochine nelle DC. Questi studi hanno portato all'identificazione della lisosomale VAMP7 come regolatore specifico nella secrezione polarizzata dell'IL-12 durante l'induzione delle cellule T. Questo suggerisce un ruolo nella secrezione di mediatori solubili neosintetizzati, degli organelli endosomiali tardivi , finora ritenuti implicati solo nella secrezione regolata di mediatori pre-costituiti come i granuli citotossici. Inoltre si è visto che VAMP3 deregola la produzione di tutte le cotochine testate; proponiamo che questa SNARE sia un regolatore della via di segnalazione del TLR9. La seconda parte del lavoro parte dal concetto che le proprietà delle DC sono soppresse dal microambiente tumorale e molte evidenze suggeriscono che le DC tollerogeniche sarebbero un elemento fondamentale nello sviluppo dello spegnimento immunologico mediato dal tumore. Diversi punti nel processo di presentazione dell'antigene sono deregolate, ma anche il pattern di citochine secrete è modificato. In particolare, come la secrezione di citochine infiammatorie diventi deregolata nelle DC esposte al tumore non è stato investigato. Ho messo a punto un modello di topi con carcinoma polmonare di Lewis (3LL) per analizzare le DC in vitro (con co-colture) e in vivo (nella milza e nel polmone). In tutti i modelli ho osservato una forte diminuzione nella produzione dell'IL-12, dopo stimolazione con agonisti del TLR. Nella milza i sottotipi di DC sono rimasti simili durante la progressione tumorale, mentre nei polmoni affetti da tumore la composizione delle DC è variata, con un'espansione delle DC CD11b e una riduzione delle DC CD103. Le DC sono state isolate da tutti e tre i modelli per analizzare l'espressione delle proteine di traffico e ho osservato che le DC esposte al tumore deregolano tutte le SNARE e in particolare VAMP3. Inoltre anche Rab27a, una GTPasi implicata nella regolazione dell'esocitosi dei granuli secretori e degli organelli lisosomiali è trovata de-regolata a livello della proteina. Queste osservazioni preliminari suggeriscono che la regolazione delle proteine di traffico nelle DC potrebbe rappresentare una nuova via bersagliata durante lo sviluppo tumorale. Description: 2011/2012 Type: Tesi di dottorato; Doctoral Thesis Mon, 22 Apr 2013 00:00:00 GMT http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8636 2013-04-22T00:00:00Z http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8599 Title: Caratterizzazione del Coralligeno del Nord Adriatico: analisi della biodiversità e della variabilità spaziale delle comunità macroalgali Authors: Kaleb, Sara Abstract: I fondali che si estendono dal Golfo di Venezia fino alle coste Slovene (Nord Adriatico) prevalentemente fangosi o detritici, sono interrotti da numerosi affioramenti rocciosi distribuiti a profondità tra 7 e 25 m. e distanti dalla costa 0.5-25 miglia nautiche. Tali affioramenti localmente chiamati “tegnùe”, “trezze”, “grebeni”, sono maggiormente concentrati tra il Delta del Po e il Golfo di Trieste (Fig. 1). Stefanon (1967) è stato il primo a descrivere alcuni di questi affioramenti, inizialmente definiti come beachrocks; la loro genesi è invece attualmente connessa alle emissioni di gas metano [1]. La migrazione di gas poco profondi attraverso i sedimenti marini induce la deposizione di carbonato di calcio, cementificando il substrato altrimenti non consolidato.La maggior parte degli affioramenti del Nord Adriatico, che mostrano un ampio spettro di morfologie e dimensioni, è formata da una base rocciosa colonizzata da bioconcrezioni calcaree [1]. Le tegnùe sono state definite formazioni coralligene, anche se differiscono dal tipico coralligeno mediterraneo sensu stricto (Ballesteros, 2006). Il coralligeno e i fondi a maërl e rodoliti sono considerati tra i principali hot-spots di biodiversità in Mediterraneo. Il coralligeno è prodotto dal concrezionamento di alghe calcaree, briozoi, serpulidi, coralli e spugne che si accrescono in condizioni sciafile (Hong, 1980; Ballesteros, 2006), mentre i fondi a rodoliti e maërl sono substrati sedimentari ricoperti da alghe calcaree libere (Corallinales o Peyssonneliaceae) (UNEP-MAP-RAC/SPA, 2008). La conoscenza dell’estensione e struttura delle formazioni coralligene in Mediterraneo è essenziale per l’individuazione di attività di gestione e protezione di questi habitat, così come indicato dalle più recenti Direttive europee e Convenzioni internazionali. Nell’ambito della Marine Strategy Framework Directive 2008/56/CE (MSFD) il “Coralligeno (C)” e i “Fondi a maërl e rodoliti” sono stati inseriti tra gli Special Habitat da caratterizzare e di cui valutare lo Stato Ecologico (GES). Lo scopo ultimo di questo studio, basato sia su attività sperimentali di campo e di laboratorio che sull’analisi di dati di letteratura, è quello di contribuire ad una più approfondita conoscenza delle comunità biotiche degli affioramenti rocciosi del Nord Adriatico. La maggior parte dell’attività di ricerca è stata incentrata sullo studio della struttura e variabilità delle comunità macroalgali, in relazione alle principali variabili ambientali e caratteristiche morfologiche degli affioramenti rocciosi del Veneto e del Friuli Venezia Giulia. È stata inoltre analizzata la componente algale dei fondi a maërl e rodoliti, che si estendono dalle coste venete fino al circalitorale Sloveno. HABITAT FONDI A MAËRL E RODOLITI Per il Nord Adriatico non sono disponibili dati recenti e rappresentativi sulla distribuzione di maërl e rodoliti. La loro presenza è stata segnalata per la prima volta nel Golfo di Trieste nell’area prospiciente le lagune di Grado e Marano (Giaccone, 1978; Orel et al., 1981-82). Successivamente uno studio condotto da Nichetto (1990) ha rilevato la presenza di talli di maërl, prevalentemente morti, sui fondali sabbiosi che si estendono da Grado a Venezia. Infine, Bressan e Giaccone (2005) hanno riportato la presenza di maërl fossile nei sedimenti del Dosso di Santa Croce posto al centro del Golfo di Trieste. Per meglio definire l’estensione di questo Habitat a scala di sottoregione, a partire dal 2008, sono state campionate 46 stazioni nel versante italiano del Golfo di Trieste [1] e al largo della Slovenia [2]. Il campionamento in collaborazione con l’ARPA-FVG è tutt’ora in corso. I campioni sono stati raccolti in immersione o mediante bennate e dragaggi. Considerando anche i dati di letteratura sui fondi mobili dal Veneto alle coste Slovene sono state rinvenute 23 Corallinales, la cui distribuzione batimetrica è compresa tra 9 e 24 m (Orel et al., 1981-82; Nichetto, 1990; Bressan e Giaccone, 2005; [1]; [2]). 15 Corallinales sono state rinvenute sotto forma di rodoliti: Lithophyllum incrustans Philippi, Lithophyllum racemus (Lamarck) Foslie, Lithophyllum corallinae (P.L.Crouan & H.M.Crouan) Heydrich, Lithophyllum pustulatum (J.V. Lamouroux) Foslie, Lithothamnion corallioides (P.L.Crouan & H.M.Crouan) (P.L.Crouan & H.M.Crouan), Lithothamnion minervae Basso, Lithothamnion philippii Foslie, Lithothamnion sonderi Hauck, Lithothamnion valens Foslie, Neogoniolithon brassica-florida (Harvey) Setchell & Mason, Neogoniolithon mamillosum (Hauck) Setchell & L.R. Mason, Phymatolithon calcareum (Pallas) W.H. Adey & D.L. McKibbin, Phymatoltihon lenormandii (Areschoug) W.H. Adey, Spongites fruticulosa Kützing), Sporolithon ptycoides Heydrich. Delle 11 Corallinales raccolte mediante dragaggi nel circalitorale sloveno 5 taxa rappresentano nuove segnalazioni per l’area di studio: Hydrolithon boreale (Foslie) Y.M. Chamberlain, L. philippii, L. minervae, L. sonderi, N. brassica-florida [2]. Nella biocenosi del Detritico Costiero e presso i banchi di Cladocora caespitosa Linnaeus, L. philippii, L. sonderi, L. minervae, L. pustulatum, L. racemus, N. brassica-florida, N. mamillosum, P. lenormandii sono stati campionati come rodoliti vivi, morti o fossili. Alcuni siti sono risultati caratterizzati prevalentemente da rodoliti sub-fossili [2]. Sui fondi mobili da Venezia a Trieste sono state censite 15 Corallinales in forma di rodoliti, in prevalenza caratteristiche del Detritico Costiero. I dati degli anni ’90 avevano evidenziato la dominanza di talli morti in particolare nell’area di Grado, che risultava anche impoverita in termini di abbondanza. Il presente studio ha invece individuato proprio al largo di Grado la presenza di facies vive di maërl e rodoliti. In particolare i fondali sabbiosi sono risultati caratterizzati da L. racemus, mentre sul substrato pelitico-sabbioso sono stati rinvenuti per la prima volta nel Golfo di Trieste talli vivi di P. calcareum, assieme alle altre due specie caratteristiche del maërl mediterraneo (L. corallioides e L. minervae) (Curiel et al., 2009; AA.VV., 2010; [1]). Poiché l’analisi della morfologia dei rodoliti sembra essere indicativa delle caratteristiche idrodinamiche e del tasso di sedimentazione, i talli raccolti in due siti al largo di Grado caratterizzati da una più cospicua presenza di forme libere sono stati classificati in base all’indice di sfericità e alla densità delle ramificazioni [1]. HABITAT CORALLIGENO La posizione, la profondità, la topografia e la struttura geologica degli affioramenti rocciosi del Nord Adriatico sono ben documentati già da tempo, come lo sono la biodiversità e la variabilità spaziale delle comunità zoobentoniche. Al contrario solo pochi studi sono stati condotti sulle macroalghe [3]. Nel presente studio sono state analizzate la biodiversità e la variabilità spaziale delle comunità macroalgali di 37 affioramenti rocciosi situati sui fondali antistanti le lagune di Venezia e Grado-Marano, a distanze dalla costa comprese tra 0.5-10 miglia nautiche e profondità tra 7 e 25 m [3]. In base alla loro morfologia ed elevazione dal substrato tali affioramenti sono stati suddivisi in 3 tipologie: i) piccole rocce sparse con elevazione di 0.5-1m; ii) rocce raggruppate con elevazione di 0.5-1m; iii) strutture ampie con rilievo fino a 3-4m. Sulle superfici orizzontali superiori di ciascun affioramento le macroalghe sono state campionate mediante grattaggi di tre aree (2500 cm2). In laboratorio sono stati analizzati il numero di taxa, la copertura di Rhodophyta, Chlorophyta, Ochrophyta e dei gruppi morfo-funzionali (forme incrostanti, filamentose ed erette). Le relazioni di questi parametri con la tipologia del substrato, la profondità e la distanza dalla costa sono state valutate mediante analisi statistica [3]. In totale sono stati identificati 173 taxa, di cui 124 Rhodophyta, 25 Ochrophyta e 24 Chlorophyta. Con l’aggiunta di dati di letteratura il numero di macroalghe censite sugli affioramenti del Nord Adriatico è di 190 taxa., comprendendo gran parte della flora della regione. Considerando il contesto biogeografico e i fondali mobili circostanti le tegnùe presentano una elevata biodiversità algale, se comparata con le formazioni coralligene del Mediterraneo. L’analisi floristica ha portato al ritrovamento di Mesophyllum macroblastum (Foslie) Adey (Hapalidiaceae, Corallinales, Rhodophyta) componente importante del coralligeno nel Mediterraneo occidentale e prima segnalazione per il Nord Adriatico. I talli gametangiali sono stati invece rinvenuti per la prima volta in Mediterraneo [4]. La morfologia e l’anatomia dei talli raccolti nel Golfo di Trieste sono state analizzate al SEM e successivamente comparate con campioni d’erbario provenienti dal Tirreno e con dati di letteratura. In base alla struttura e anatomia dei concettacoli tetrasporangiali è stata proposta una nuova chiave dicotomica per l’identificazione dei taxa Mediterranei del genere Mesophyllum. È stato inoltre segnalato per la prima volta in Mediterraneo Phymatolithon lamii (Lemoine) Y. Chamberlain (Hapalidiaceae, Corallinales, Rhodophyta), specie aliena incrostante nord atlantica [5]. Lo studio morfo-anatomico al SEM dei campioni raccolti ha evidenziato alcune differenze rispetto ai tipi e ai campioni delle Isole Britanniche. Sono stati inoltre individuati e descritti i caratteri che distinguono P. lamii dalle altre due specie del genere ed è stata proposta una nuova chiave dicotomica basata sulla morfologia esterna del tallo e la struttura dei concettacoli. Il ritrovamento di P. lamii al di fuori del suo range ottimale di temperatura e la presenza di entrambe le fasi riproduttive sembrano indicare una maggiore capacità adattativa di questa specie. È quindi possibile che P. lamii sia presente anche in altre aree del Mediterraneo, ma confuso con il congenerico P. lenormandii. Oltre a P. lamii sugli affioramenti rocciosi campionati sono state rinvenute altre 7 specie aliene, già segnalate nella laguna di Venezia: Antithamnion hubbsii E.Y.Dawson, Desmarestia viridis (O.F.Müller) J.V.Lamouroux, Heterosiphonia japonica Yendo, Neosiphonia harveyi (J.W.Bailey) M.S.Kim, H.G.Choi, Guiry & G.W.Saunders, Polysiphonia morrowii Harvey, Polysiphonia stricta (Dillwyn) Greville, Solieria filiformis (Kützing) P.W.Gabrielson [3]. In totale sono state rinvenute 5 Peyssonneliaceae e 22 Corallinales, tra cui le più comuni sono L. pustulatum e L. philippii. È peculiare l’assenza di alcune alghe comuni nelle formazioni coralligene tipiche del Mediterraneo, che sono invece presenti sui substrati rocciosi sottocosta e poco profondi del Golfo di Trieste, quali Halimeda tuna (Ellis & Solander) J.V. Lamouroux e Flabellia petiolata (Turra) Nizamuddin. La copertura media (14.8 % ± 29.2 %) è bassa rispetto ai valori riportati per il Mediterraneo occidentale (>120 %) Le specie più abbondanti sono Peyssonnelia sp.pl., L. philippii, L. pustulatum e Zanardinia typus (Nardo) P.C.Silva. Per quanto riguarda i gruppi morfo-funzionali il numero delle alghe filamentose (13.4 ± 9.0 taxa) è maggiore rispetto alle forme incrostanti (6.4 ± 5.6 taxa) ed erette (5.4 ± 3.8 taxa). Risultati opposti sono stati ottenuti considerando invece le coperture medie (incrostanti: 8.2 % ± 19.3 %; erette: 4.2 % ± 8.6 % ; filamentose: 2.3 % ± 5.0 % ). Sia il numero di macroalghe che la copertura mostrano un'elevata variabilità correlata alla distanza dalla costa, alla topografia degli affioranti e alla profondità. Tale variabilità è più marcata sottocosta in vicinanza di sbocchi fluviali e alla laguna di Venezia. Questi affioramenti, sottoposti ad elevata sedimentazione, sono caratterizzati da bassi valori di copertura e dalla presenza di taxa a tallo eretto o comuni nelle acque di transizione e sulle strutture artificiali, quali ad esempio Ulva laetevirens Areschoug, Cryptonemia lomation (Bertoloni) J.Agardh, Rhodophyllis divaricata (Stackhouse) Papenfuss, Rhodymenia ardissonei (Kuntze) Feldmann, Ceramium diaphanum (Lightfoot) Roth, Chondria capillaris (Hudson) M.J.Wynne, Dictyota dichotoma v. intricata (C.Agardh) Greville. Gli affioramenti posti a maggior profondità al largo delle lagune di Grado e Venezia mostrano invece elevati valori di copertura di specie biocostruttrici, quali L. stictaeforme, L. philippi, N. mamillosum. In particolare gli affioramenti del Golfo di Trieste, caratterizzati da una minor torbidità e sedimentazione, presentano il numero di macroalghe e i valori di copertura di specie incrostanti maggiori. In generale le forme filamentose mostrano un elevato numero di taxa in entrambe le aree ma con bassi valori di copertura, ad eccezione di Pseudochlorodesmis furcellata (Zanardini) Børgesen . Dato che la MSFD richiede che il GES sia definito a livello ecosistemico, lo studio è stato integrato con dati relativi alle comunità zoobentoniche e alla fauna ittica [6]. È stata quindi ottenuta una check-list di 1001 taxa, che evidenzia la grande biodiversità degli affioramenti del Nord Adriatico. I gruppi principali presenti sugli affioramenti biogenici sono molluschi (256 taxa), alghe (190 taxa), policheti (144 taxa), crostacei (124 taxa), spugne (68 taxa), tunicati (40 taxa) e pesci (80 taxa). In generale gli affioramenti Adriatici sono contraddistinti da un maggior numero di sospensivori e da una ridotta complessità strutturale delle comunità biotiche rispetto al coralligeno mediterraneo. Gli affioramenti del Veneto, probabilmente anche in relazione al numero di studi condotti, presentano un maggior numero di taxa zoobentonici rispetto a quelli del Friuli Venezia Giulia e ai fondali Sloveni. I principali biocostruttori delle tegnùe sono rappresentati da alghe calcaree e policheti. C. caespitosa risulta rara sugli affioramenti italiani mentre mostra un’importante attività di biocostruzione in Slovenia. Complessivamente sono stati censiti 17 taxa considerati caratteristici del coralligeno (sensu Ballesteros, 2006), al contrario i grandi antozoi e briozoi sono assenti, ad eccezione di Myriapora truncata Pallas rinvenuta in Slovenia. L'assenza di queste specie è probabilmente legata alla scarsa elevazione degli affioramenti, alla risospensione dei sedimenti e alle ridotte dimensioni delle superfici colonizzabili. Il ruolo dei bioerosori sui processi di biocostruzione è stato poco indagato. In totale sono stati censiti 14 taxa bioerosori, di cui 4 poriferi, 2 sipunculidi, 4 bivalvi, 3 policheti e 1 echinoderma. In conclusione questo studio rappresenta un importante contributo alla caratterizzazione della componente macroalgale del coralligeno di fondo duro e mobile in Nord Adriatico. Sono state individuate facies vive di maërl in diversi siti al largo della laguna di Grado e definite le tipicità del coralligeno degli affioramenti rocciosi adriatici, adattato a elevati tassi di sedimentazione e ampie escursioni termiche e di salinità. Le tegnùe, per la ridotta profondità e particolare topografia, presentano caratteristiche in parte simili al coralligeno descritto per le coste Pugliesi (Sarà, 1969). Le conoscenze acquisite durante questa ricerca hanno permesso di: - designare due affioramenti come nuova area SIC per il Friuli Venezia Giulia (IT3330009 “Trezze San Pietro e Bardelli”) che con la Deliberazione della Giunta regionale n. 1623 del 20 settembre 2012 è entrata a far parte della rete Natura 2000. - includere ai fini dell’attuazione della MSFD il nord Adriatico tra le 11 assessment area per gli Habitat “Coralligeno” e “Fondi a maërl e rodoliti”. Lo Stato Ecologico è stato indicato in base al “giudizio esperto”, dato che per i due Habitat mancano a livello nazionale ed europeo indici validati per la definizione dei valori soglia del GES. Description: 2011/2012 Type: Tesi di dottorato; Doctoral Thesis Mon, 25 Mar 2013 00:00:00 GMT http://www.openstarts.units.it:80/dspace/handle/10077/8599 2013-03-25T00:00:00Z